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Claudin18.2-VLP,CAR阳性率检测应用案例

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2022-01-20 15:00

在CAR-T细胞治疗领域的研究中,实体瘤相关的治疗方法开发一直是亟待突破的方向。Claudin18.2在实体瘤上的靶点优势使得研究人员在CAR-T细胞免疫治疗研究领域对其进行了广泛的布局。例如, 2021年11月15日,细胞治疗企业科济药业发布公告,其开发的全球首款Claudin18.2 CAR-T候选产品CT041已被欧洲药品管理局(EMA)授予优先药物(PRIME)资格,用于治疗胃癌/胃食管结合部癌。值得一提的是,这也是全球首个入选PRIME计划的实体瘤CAR-T产品。

2022年5月9日,《Nature-Medicine》期刊发表的CT041治疗胃肠道癌症的I期临床试验数据(NCT03874897)结果显示:所有37例晚期消化道肿瘤患者的客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为48.6%(95%CI,31.9,65.6)和73.0%(95%CI,55.9,86.2),安全性方面副反应整体可控,耐受性良好。此次临床数据展现了Claudin 18.2 CAR-T细胞疗法攻克实体瘤的突破性进展。

靶向Claudin18.2 CAR-T领域临床研究

研究领域 临床阶段 临床试验代码 研发代码 适应症 企业
CAR-T Phase 1/2 NCT04581473 CT041 胃腺癌,胰腺癌,胃食管交界处腺癌 科济生物
Phase 1 NCT04404595 胃癌,胰腺癌
Phase 1 NCT03874897 CAR-CLDN18.2 T-Cells 晚期实体瘤
Phase 1 NCT03198052 肺癌 昭泰医疗
Phase 1 NCT04467853 LCAR-C18S cells 胃癌 南京传奇
Phase 1 NCT04966143 LY011 胰腺癌 隆耀生物
Phase 1 NCT04977193 晚期胃腺癌
Phase 1 NCT04842812 TILs and CAR-TILs targeting Claudin18.2 肝癌,肺癌,乳腺癌,结直肠癌,脑瘤,实体瘤 广州医科大学附属第二医院
Phase 1 NCT05199519 IBI345 Claudin18.2阳性实体瘤 信达生物

数据来源:药渡,clinicaltrials.gov,截止2022/1/20

案例详情

专为Claudin18.2 CAR检测设计的Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218

ACROBiosystems专门搭建了基于HEK293表达系统的VLP技术平台,通过包膜VLP技术,将聚集在细胞膜表面的构象完整的全长四次跨膜蛋白Claudin18.2,组装在类病毒颗粒表面,从而获得可溶性的、高浓度的、正确折叠的完整Claudin18.2,Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218)是一款专为CAR检测设计的产品,在C端带有一个GFP标签,推荐用于CAR阳性率检测。

Claudin18.2-VLP(Cat. No. CL2-HF218)为CAR检测“出彩”【应用案例】

检测方法:流式细胞术

检测仪器:BD FACS Celesta流式细胞分析仪 (BD Biosciences)

样本信息:Anti-Claudin18.2 CAR-293细胞

主要试剂:

  • - GFP标签的Claudin18.2-VLP蛋白(Fluorescent Human Claudin18.2 Full Length Protein-VLP (HEK293) ACROBiosystems, Cat. No. CL2-HF218
  • - VLP蛋白(Fluorescent Virus-Like Particle (VLP) isotype control, ACROBiosystems, Cat. No. VLP-NF2P4

简要流程:

  • 1. 用含10% FBS的DMEM培养基在37℃,5% CO2培养箱中培养Anti-Claudin18.2 scFv-过表达293细胞。
  • 2. 收集细胞,用FACS缓冲液清洗细胞一次。
  • 3. 进行细胞计数及存活率测定,等分细胞悬液,每管 2×105 活细胞。
  • 4. 用FACS缓冲液将Human Claudin18.2蛋白(Cat. No. CL2-HF218)稀释成3 μg/mL浓度后,取100 μL稀释后的样品溶液加入细胞悬液管中。混合均匀,4℃孵育60分钟。
  • 5. 用FACS缓冲液洗涤细胞3次,并用200 μL PBS重悬细胞。
  • 6. 转移细胞至流式管进行流式细胞分析。

检测结果:

  • 经FACS验证, Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合,不与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs特异性结合。

用阴性对照蛋白(Cat. No. VLP-NF2P4)和Human Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)分别结合转染Claudin18.2-CAR-293细胞,结果表明,Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合。

用阴性对照蛋白(Cat. No. VLP-NF2P4)和Human Claudin18.2-VLP 蛋白(Cat. No. CL2-HF218)分别与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs结合,结果表明,无非特异性结合信号。

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