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预制前体纤维(PFFs)——神经退行造模新手段

前体纤维原(PFFs),神经退行造模新手段
预制前体纤维(PFFs)背景介绍
蛋白错误折叠和聚集示意图
蛋白错误折叠和聚集示意图
蛋白质聚集是阿尔兹海默病(AD)、帕金森病(PD)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)以及亨廷顿舞蹈症(HD)等神经退行性疾病的主要病理特征。在病理状态下,Tau、Amyloid beta、alpha-synuclein、TDP-43、Huntingtin等蛋白发生构象改变,进而聚集形成具有传播能力的“种子”,诱发细胞内源性蛋白错误折叠和聚集,并通过细胞间传递的方式在神经元间传播,蛋白聚集体持续向纤维原和不溶性纤维的形态发展,最终形成蛋白沉淀和缠结。预制前体纤维(pre-formed fibrils,PFFs),即在体外预先制备,具有这类 “种子”活性、能够持续招募可溶性病理蛋白形成聚集体的纤维样蛋白。
建立细胞和动物等退行性疾病模型在发现潜在的致病机理和疾病分子机制、评估治疗干预措施的潜在疗效、初步评估候选药物分子的安全性中起到重要作用。相比于传统的疾病造模方式,PFFs诱导的病理发生不依赖于基因编辑,也不依赖于化学或物理损伤,可以更好的模拟自然发生的病理状态和病理进程,因此,PFFs是具有潜力的新型疾病造模工具。
预制前体纤维(PFFs)的制备和验证
PFFs可采用室温振摇的方式制备,或用一定浓度肝素诱导单体病理蛋白得到。PFFs的质量控制和使用前的准备对实验成功至关重要:成功制备PFFs关键在于使用高纯度、高浓度、构象正确的高质量单体蛋白;同时,由于PFFs的应用场景是细胞和动物实验,对内毒素的控制也是影响PFFs实验结果的重要因素;在使用PFFs之前,采用超声将PFFs处理成50 nm或更短的长度可以保证PFFs招募单体的活性,更利于细胞内吞PFFs。
PFFs的聚集形态和招募活性可以通过电子显微镜和硫黄素T(ThT)荧光检测法进行验证。利用电镜可以观察到PFFs不同长度的纤维结构;硫黄素T是检测β折叠结构的经典实验,原理是PFFs招募单体后形成β折叠结构,当ThT结合至β折叠结构时,致使荧光值升高,从而反映出PFFs招募单体的活性。
预制前体纤维(PFFs)产品
预制前体纤维(PFFs)产品列表
Aneuro是ACRO专注于神经领域的产品线,可提供Tau-441 PFFs、alpha-synuclein PFFs、Amyloid beta PFFs、TDP-43 PFFs、SOD-1 PFFs等产品,助力打造神经退行性疾病模型。

Tau-441 PFFs即将现货发售,alpha-synuclein PFFs、Amyloid beta PFFs、TDP-43 PFFs、SOD-1 PFFs正同步研发中,敬请期待~ 点击咨询

预制前体纤维(PFFs)产品优势
由高质量单体诱导:单体纯度及均一性经MALS验证>95%,更利于PFFs的形成和保证诱导活性
单体内毒素≤0.05 EU/μg,适合各类细胞和动物实验
通过电镜和ThT荧光检测全面验证PFFs的聚集形态和招募活性,分享protocol
提供更个性化的产品与服务,多种荧光标记方案可供定制选择:Star Staining 定点标记,Biotin标记,化学标记等,满足体内、体外实验不同需求
货期及批间更稳定,质控严格,性价比高
预制前体纤维(PFFs)产品验证数据
电镜观测PFFs的聚集形态
如下图所示,电镜下的Tau-441 PFFs具有明显的纤维结构,证明了我们的Tau-441 PFFs产品为聚集体。
前体纤维原(PFFs)电镜图

TEM of Human Tau-441/2N4R Pre-formed Fibrils Protein (Cat. No. TAU-H5115).

ThT荧光检测验证PFFs的招募活性
我们通过ThT荧光检测验证了Tau-441 PFFs具有招募Tau单体聚合的能力:与只加入Tau单体的实验组对比,加入Tau-441 PFFs更快地诱导了Tau蛋白的聚合。
前体纤维原(PFFs)招募活性

Thioflavin T emission curves show increased fluorescence (correlated to tau aggregation) over time when tau wild-type monomers (Cat. No. TAU-H5117) are combined with tau wild-type Pre-formed Fibrils (Cat. No. TAU-H5115).

申请 Protocol

参考文献
  • 1. Stroo E, Koopman M, Nollen EA, Mata-Cabana A. Cellular Regulation of Amyloid Formation in Aging and Disease. Front Neurosci. 2017 Feb 14;11:64. doi: 10.3389/fnins.2017.00064. PMID: 28261044; PMCID: PMC5306383.
  • 2. Guo JL, Lee VM. Seeding of normal Tau by pathological Tau conformers drives pathogenesis of Alzheimer-like tangles. J Biol Chem. 2011 Apr 29;286(17):15317-31. doi: 10.1074/jbc.M110.209296. Epub 2011 Mar 3. PMID: 21372138; PMCID: PMC3083182.

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