嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法是一种新的治疗癌症的方法，简单来说，就是体外改造T细胞，使其表面表达特异性识别肿瘤表面抗原的受体片段，然后输入患者体内，不需要抗原递呈细胞（APC）的帮助，直接靶向体内癌细胞并发挥免疫杀伤作用。

尽管早期CAR-T细胞疗法的提出振奋人心，但通往临床成功的道路并不容易。Juno和Kite Pharma的临床试验均以脑水肿引起的不明原因死亡而告终，这给整个行业蒙上了阴影。

期待已久的突破终于在今年到来。诺华公司的CAR-T细胞疗法Kymriah，今年八月份被美国FDA批准用于治疗25岁以下的急性淋巴性白血病（ALL）患者。这一成功标志着靶向细胞疗法发展的一个里程碑，并推动了针对其他肿瘤特异性抗原CAR-T疗法的发展和进步。除了热度不减的CD19以外，更多类别的肿瘤细胞表面特异性抗原被作为靶点被大力开发用于CAR-T细胞免疫疗法。

ACROBiosystems开发了一系列针对CAR-T的靶点蛋白，其中包括许多生物素预先标记的蛋白，这些生物素预先标记的蛋白适用于筛选CAR表达的细胞。此外，我们还开发了一系列难表达的蛋白，如BCMA，ROR1和EGFRVIII。

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CAR-T靶点列表

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实验案例:检测CD19 CAR的表达

如下实验案例由MacLeod DT等发表于Jounal of Molecular therapy，更多详情请参见MacLeod DT, et al., 2017, Mol Ther. 25(4):949-961.doi: 10.1016/j.ymthe.2017.02.005.

• 实验方法：流式细胞术
• 主要试剂：生物素标记的CD19-Fc蛋白 (Cat.No.CD9-H8259) 购自ACROBiosystems公司，PE标记的链霉亲和素（Streptavidin-PE）和anti-CD3-BV711抗体购自BioLegend公司。
• 检测样品：TRC1-2-treated, AAV:TRAC:CAR-transduced T细胞
• 简要检测流程：
• 第一步：利用CD19 CAR能特异性结合CD19蛋白的特性，如果待检T细胞正常表达了CD19 CAR，生物素标记的CD19-Fc蛋白就能被标记到待检T细胞表面;
• 第二步：利用生物素能特异性结合亲和素（Streptavidin-PE）和Anti-CD3-BV711抗体能特异性结合CD3分子的特性，如果待检T细胞表面有生物素和CD3分子，链霉亲和素上的PE和Anti-CD3抗体上的BV711荧光标记就能被标记到待检T细胞表面；
• 第三步：将制备好的单细胞悬液上机进行流式细胞分析。
• 检测结果：利用流式细胞术对两组待检T细胞表面CD3分子和CD19 CAR表达情况的检测结果显示，CD3阴性T细胞群中CD19 CAR表达的比例要高于CD3阳性T细胞群。（更多详情请参见MacLeod DT, et al., 2017, Mol Ther. 25(4):949-961.doi: 10.1016/j.ymthe.2017.02.005.）
• Figure A. Activated T cells were electroporated with TRC1-2 mRNA and transduced with AAV:TRAC:CAR at an MOI of 400,000 vg/cell and cultured for 5 days in the presence of IL-2. Five days post-transduction, cells were stained for expression of the CAR using a biotinylated CD19-Fc reagent and CD3, with TRC1-2-treated, mock-transduced cells used as a control for gating of CAR expression. CD3+ cells were then depleted. Enriched CD cells were cultured for 3 additional days in the presence of IL-15 and IL-21 and then analyzed again by flow cytometry for CD3 and CAR expression.

参考文献

• (1) Yu S, et al., 2017, J Hematol Oncol.doi: 10.1186/s13045-017-0444-9.
• (2) Khalil DN, et al., 2015, Adv Cancer Res. 128:1-68.
• (3) Mellman I, et al., 2011, Nature. 480(7378):480-489.
• (4) MacLeod DT, et al., 2017, Mol Ther. 25(4):949-961.doi: 10.1016/j.ymthe.2017.02.005.