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CAR-T靶点蛋白免费试用

2017-09-21 09:31

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嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法是一种新的治疗癌症的方法,简单来说,就是体外改造T细胞,使其表面表达特异性识别肿瘤表面抗原的受体片段,然后输入患者体内,不需要抗原递呈细胞(APC)的帮助,直接靶向体内癌细胞并发挥免疫杀伤作用。

尽管早期CAR-T细胞疗法的提出振奋人心,但通往临床成功的道路并不容易。Juno和Kite Pharma的临床试验均以脑水肿引起的不明原因死亡而告终,这给整个行业蒙上了阴影。

期待已久的突破终于在今年到来。诺华公司的CAR-T细胞疗法Kymriah,今年八月份被美国FDA批准用于治疗25岁以下的急性淋巴性白血病(ALL)患者。这一成功标志着靶向细胞疗法发展的一个里程碑,并推动了针对其他肿瘤特异性抗原CAR-T疗法的发展和进步。除了热度不减的CD19以外,更多类别的肿瘤细胞表面特异性抗原被作为靶点被大力开发用于CAR-T细胞免疫疗法。

ACROBiosystems开发了一系列针对CAR-T的靶点蛋白,其中包括许多生物素预先标记的蛋白,这些生物素预先标记的蛋白适用于筛选CAR表达的细胞。此外,我们还开发了一系列难表达的蛋白,如BCMAROR1EGFRVIII

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CAR-T靶点列表

BCMA CAIX CD138 CD19 CD20
CD22 CD30 CD33 CD38 HGFR
EGFR EGFRVIII EpCAM FOLR1 GPC3
HER2 IL13Rα2 MSLN MUC1 ROR1

推荐产品

Targets Diseases Recommended Products
BCMA 多发性骨髓瘤、白血病、B细胞淋巴瘤 BC7-H82F0 (Biotinylated Human BCMA)
BCA-H522Y (Human BCMA)
ROR1 白血病,乳腺癌r RO1-H821y (Biotinylated Human ROR1)
RO1-H522y (Human ROR1)
CD33 急性髓系白血病 CD3-H82E7 (Biotinylated Human CD33)
CD3-H5226 (Human CD33)
EGFRVIII 胶质母细胞瘤 EGR-H82E0 (Biotinylated Human EGFRVIII)
EGI-H52H4 (Human EGFRvIII)
CD30 白血病,B细胞淋巴瘤 CD0-H82E6 (Biotinylated Human CD30)
CD0-H5229 (Human CD30)
EGFR 非小细胞肺癌,上皮癌、胶质瘤 EGR-H82E3 (Biotinylated Human EGFR)
EGR-H5222 (Human EGFR)
FOLR1 卵巢癌 FO1-M82E9 (Biotinylated Mouse FOLR1)
FO1-H5229 (Human FOLR1)
HER2 卵巢癌,乳腺癌,胶质母细胞瘤,骨肉瘤 HE2-H822R (Biotinylated Human Her2)
HE2-H5225 (Human Her2)
c-MET/HGFR 恶性黑色素瘤,乳腺癌 MET-H82E1 (Biotinylated Human HGF R)
MET-H5227 (Human HGF R)
CAIX 肾细胞癌 CA9-H5226(Human CA9 (38-414))
CD19 急性白血病、B细胞淋巴瘤 CD9-H8259 (Biotinylated Human CD19)
CD20 白血病,B细胞淋巴瘤 CD0-H5268 (Human MS4A1 / CD20, Fc Tag)
CD22 白血病,B细胞淋巴瘤 SI2-H5228 (Human Siglec-2 / CD22)
EpCAM 肝肿瘤,胃肿瘤 EPM-H82E8 (Biotinylated Human EpCAM)
EPM-H5223 (Human EpCAM)
GPC3 原发性肝细胞癌 GP3-H5223 (Human Glypican 3)
IL13Rα2 胶质瘤 IL2-H5257 (Human IL13Rα2, Fc Tag)
MSLN 间皮瘤,卵巢癌 MSN-H82E9 (Biotinylated Human MSLN)
MSN-H5223 (Human MSLN)
MUC1 精囊癌 MU1-H5252 (Human MUC-1, Fc Tag)
CD138 多发性骨髓瘤 SD1-H5228 (Human Syndecan-1 / CD138)
CD38 B细胞恶性肿瘤 CD8-H82E7 (Biotinylated Human CD38)
CD8-H5224 (Human CD38)

实验案例:检测CD19 CAR的表达

如下实验案例由MacLeod DT等发表于Jounal of Molecular therapy,更多详情请参见MacLeod DT, et al., 2017, Mol Ther. 25(4):949-961.doi: 10.1016/j.ymthe.2017.02.005.

  • 实验方法:流式细胞术
  • 主要试剂:生物素标记的CD19-Fc蛋白 (Cat.No.CD9-H8259) 购自ACROBiosystems公司,PE标记的链霉亲和素(Streptavidin-PE)和anti-CD3-BV711抗体购自BioLegend公司。
  • 检测样品:TRC1-2-treated, AAV:TRAC:CAR-transduced T细胞
  • 简要检测流程:
  • 第一步:利用CD19 CAR能特异性结合CD19蛋白的特性,如果待检T细胞正常表达了CD19 CAR,生物素标记的CD19-Fc蛋白就能被标记到待检T细胞表面;
  • 第二步:利用生物素能特异性结合亲和素(Streptavidin-PE)和Anti-CD3-BV711抗体能特异性结合CD3分子的特性,如果待检T细胞表面有生物素和CD3分子,链霉亲和素上的PE和Anti-CD3抗体上的BV711荧光标记就能被标记到待检T细胞表面;
  • 第三步:将制备好的单细胞悬液上机进行流式细胞分析。
  • 检测结果:利用流式细胞术对两组待检T细胞表面CD3分子和CD19 CAR表达情况的检测结果显示,CD3阴性T细胞群中CD19 CAR表达的比例要高于CD3阳性T细胞群。(更多详情请参见MacLeod DT, et al., 2017, Mol Ther. 25(4):949-961.doi: 10.1016/j.ymthe.2017.02.005.)
  • Figure A. Activated T cells were electroporated with TRC1-2 mRNA and transduced with AAV:TRAC:CAR at an MOI of 400,000 vg/cell and cultured for 5 days in the presence of IL-2. Five days post-transduction, cells were stained for expression of the CAR using a biotinylated CD19-Fc reagent and CD3, with TRC1-2-treated, mock-transduced cells used as a control for gating of CAR expression. CD3+ cells were then depleted. Enriched CD cells were cultured for 3 additional days in the presence of IL-15 and IL-21 and then analyzed again by flow cytometry for CD3 and CAR expression.

参考文献







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